High genetic diversity of Anaplasma marginale infecting dairy cattle in northeastern Brazil / Alta diversidade genética de Anaplasma marginale em bovinos de leite no nordeste do Brasil

Abstract Anaplasma marginale is an obligate intracellular Gram-negative bacterium found in ruminants' erythrocytes and is the etiological agent of bovine anaplasmosis. The bacterium's genetic diversity has been characterized based on sequences of major surface proteins (MSPs), such as MSP1α. The aim of the present study was to investigate the genetic diversity of A. marginale in cattle in the state of Maranhão, northeastern Brazil. To this end, 343 blood samples were harvested and subjected to iELISA assays using the recombinant surface protein MSP5. Out of 343 blood samples, 235 (68.5%) were randomly chosen and submitted to DNA extraction, qPCR and conventional PCR targeting the msp1α gene to determine amino acid sequences and classify the genotypes. The iELISA results showed 81.34% seropositivity (279/343), whereas qPCR revealed 224 positive samples (95.32%). Among these qPCR-positive samples, 67.4% (151/224) were also positive in the cPCR. Among the 50 obtained sequences, 21 strains had not been previously reported. Regarding the genotypes, H (26/50) and E (18/50) were identified most often, while genotypes F and C were only identified twice each and B and G once each. In conclusion, high prevalence and genetic diversity for A. marginale were observed in dairy cattle herds in the state of Maranhão.

Resumo Anaplasma marginale é uma bactéria Gram-negativa intracelular obrigatória de eritrócitos de ruminantes e responsável pela anaplasmose bovina. A diversidade genética de A. marginale tem sido caracterizada com base nas sequências das principais proteínas de superfície (MSPs), como a MSP1α. O objetivo deste estudo foi investigar a diversidade genética de A. marginale em bovinos no estado do Maranhão, Nordeste do Brasil. Dessa forma, 343 amostras de sangue foram submetidas ao ensaio iELISA, utilizando-se a proteína recombinante MSP5. Das 343 amostras de sangue, 235 (68,5%) foram escolhidas aleatoriamente e submetidas à extração de DNA, qPCR e PCR convencional para gene msp1α, para determinação das sequências de aminoácidos e classificação dos genótipos. Os resultados do iELISA mostraram 81,34% de soropositividade (279/343), enquanto qPCR revelou 224 amostras positivas (95,32%). Dentre estas na qPCR, 67,4% (151/224) mostraram-se positivas no PCR convencional. Das 50 sequências obtidas, 21 cepas não haviam sido relatadas anteriormente. Em relação aos genótipos, H (26/50) e E (18/50) foram os mais frequentes, enquanto os genótipos F e C foram identificados apenas duas vezes cada, e B e G uma vez cada. Em conclusão, alta prevalência e marcante diversidade genética de A. marginale foram observadas em rebanhos leiteiros no estado do Maranhão.

Bovine brucellosis in slaughterhouses controlled by Federal and Municipal Inspection Services in the state of Maranhão, Brazil / Brucelose bovina em frigoríficos com Serviços de Inspeção Federal e Municipal no estado do Maranhão

The aims of the current study were to investigate the prevalence of bovine brucellosis, to correlate laboratory results of serum reactive samples to the serology of animals presenting serous pouches, and to identify possible risk factors for the development of the disease. In order to do so, 1,265 bovine blood samples were collected from male and female animals bred in different counties in Maranhão state, Brazil, and in other regions of the country. The animals were slaughtered in two slaughterhouses controlled by the Federal Inspection Service (FIS), and in two others controlled by the Municipal Inspection Service (MIS), of regions such as Açailândia and Imperatriz. Samples were tested for specific antibodies by using buffered acidified antigen (BAA) and 2-mercaptoethanol in combination with slow serum agglutination (2-ME + SSA). Additionally, an epidemiological questionnaire was applied to 100 owners, who provided animals to the slaughterhouses, to enable investigating the risk factors for bovine brucellosis. Fifteen serous pouches of animals presenting this lesion were also collected at slaughter time. Thirty-nine out of the analyzed samples were reacted to BAA, whereas 15 reacted to the 2-ME + SSA test; only one male was reagent and it resulted in 1.19% prevalence. One out of the 15 collected serous pouches reacted to the 2-ME + SSA test. The risk factors identified in this study were: the incidence of miscarriages, the sale of animals without previous examination, and the failure in testing the animals before introducing them in herds and before slaughter. It was possible to conclude that the animals slaughtered in the herein evaluated slaughterhouses were infected with Brucella abortus, as well as that this infection prevailed in females.(AU)

Os objetivos do estudo foram determinar a prevalência da brucelose bovina, relacionar resultados laboratoriais de amostras séricas reagentes com a sorologia de animais que apresentavam bursites e, ainda, identificar possíveis fatores de risco para a enfermidade. Para isso, no abate foram coletadas 1.265 amostras de sangue bovino, entre machos e fêmeas, procedentes de diferentes municípios maranhenses e de outras regiões do Brasil, abatidos em dois frigoríficos com Serviço de Inspeção Federal e dois com Serviço de Inspeção Municipal, nas regionais de Açailândia e Imperatriz. As amostras foram testadas para a presença de anticorpos específicos pelos testes do antígeno acidificado tamponado e 2-mercaptoetanol combinado à soroaglutinação lenta (2-ME + SAL). Para realizar o estudo dos fatores de risco, adicionalmente aplicou-se um questionário epidemiológico com 100 proprietários que forneceram animais aos frigoríficos. Foram também coletadas 15 amostras de material de bursite de animais que apresentaram a referida lesão no momento do abate. Do total de amostras analisadas, 39 foram reagentes ao antígeno acidificado tamponado e 15 foram confirmadas no 2-ME + SAL. Apenas um macho foi reagente, o que resultou em prevalência de 1,19%. Das 15 amostras de material de bursites coletadas, uma foi reagente no teste 2-ME + SAL. Os fatores de risco identificados no estudo foram: ocorrência de abortamentos, venda de animais sem exames e não realização de exames que atestem os animais antes da inclusão nos rebanhos para abate. Concluiu-se que a infecção por Brucella abortus em animais abatidos nos frigoríficos avaliados está presente e ocorre com maior frequência em fêmeas.(AU)

Frequência de anticorpos e fatores de risco para a infecção pelo vírus da diarreia viral bovina em fêmeas bovinas leiteiras não vacinadas na região Amazônica Maranhense, Brasil / Frequency of antibodies and risk factors of bovine viral diarrhea virus infection in non-vaccinated dairy cows in the Maranhense Amazon region, Brazilfonte 10

O presente estudo teve como objetivo determinar a frequência e os fatores de risco para a infecção pelo vírus da diarreia viral bovina (BVDV) em fêmeas bovinas leiteiras na região amazônica maranhense. Amostras de soro de animais não vacinados contra o BVDV e provenientes de 40 propriedades foram submetidas à técnica de ELISA indireto. Em cada propriedade avaliada, aplicou-se ainda um questionário epidemiológico para investigar os fatores de risco que poderiam estar associados à infecção pelo vírus. As amostras foram coletadas de animais que apresentavam ou não sinais clínicos sugestivos da infecção pelo BVDV. Das 400 amostras de soro analisadas, 61,5 por cento (n=246) foram reagentes com a detecção de bovinos sorologicamente positivos em 95 por cento (n=38) das propriedades. Dentre os fatores de risco avaliados, produção de leite (1-5L), ausência de assistência veterinária, uso de monta natural e monta natural associada à inseminação artificial apresentaram significância estatística (P<0,05) associada à infecção pelo BVDV. Os resultados do estudo indicam que a frequência de anticorpos contra o BVDV foi elevada na região amazônica maranhense e que os fatores relacionados às características das propriedades e ao manejo foram associados ao risco de infecção pelo BVDV.

This study was performed in order to determine the frequency of bovine viral diarrhea virus (BVDV), and the main factors related to the frequency of the infection in dairy cows not vaccinated against BVDV from Maranhense Amazon region. Serum samples were submitted to an indirect ELISA test for detection of BVDV antibodies. An epidemiological questionnaire was applied for each herd to investigate variables that could beassociated with this infection. Serum samples were collected from 40 farms, with or without clinical signs of BVDV infection. From 400 serum samples examined, 61.5 percent (n=246) in 95 percent (n=38) of the herds were positive for ELISA. Variables identified as risk factors such as milk production (1-5L), absence of veterinary assistance, use of natural breeding or natural breeding associated with artificial insemination. These risk factors presented statistical significance (P<0.05) associated to BVDV infection. These results indicate that BVDV infection is high in the studied region and that factors related to the herd characteristic and management were associated with the risk of infection by BVDV.

Biometry of Trypanosoma vivax found in a calf in the state of Maranhão, Brazil

Blood samples from cattle presenting signs of anemia, lethargy, weakness and general weight loss were collected. Trypanosoma vivax was detected in the blood smears of a calf. This paper reports the first recorded occurrence of T. vivax in the state of Maranhão, northeastern region of Brazil, and provides the biometrical data of the parasite.

Amostras de sangue foram coletadas de bovinos que apresentaram sinais de anemia, letargia, fraqueza e perda de peso. Trypanosoma vivax foi detectado em esfregaços sanguíneos de um bezerro. Este trabalho registra, pela primeira vez, a ocorrência de T. vivax no Estado do Maranhão, Região nordeste do Brasil, e fornece os dados biométricos do parasito.